单克隆细胞株制备
服务简介：
单克隆筛选是新一代细胞克隆筛选和挑取技术，细胞克隆筛选系统能够更少时间里，自动化筛选并挑取更高水平表达的细胞克隆，拥有5组荧光通道，可以同时使用3组，细胞克隆筛选系统避免有限稀释，快速高效筛选挑取杂交瘤克隆，建立稳定细胞株，干细胞及特殊表面标记细胞挑取及昆虫细胞筛选挑取。
单克隆筛选方法有有限稀释法，半固体培养基挑选法，以及流式细胞术挑选法等。这其中有好多需要关注的点，例如挑选细胞的参数，挑选方法本身对细胞的损伤等。所以说，一个高效的筛选方法绝对能让工作效率提高好几倍。
有限稀释法是目前常用的一种常规武器，这种方法筛选细胞的好处就是基本上不会伤害细胞。整个过程中细胞所经历的，也仅仅是在移液枪头中的短暂停留，因此几乎是零损伤。不过，这种方法的弊端也是显而易见，就是效率问题。首先是铺板效率，虽然不到一分钟能将一块96孔板铺满，但是一般来说96孔中有细胞的概率在2/3左右，其中单个细胞的概率就更小了，这些细胞要经过一段时间的生长，抗体分泌之后，在其上清液中去检测抗体含量，流程耗时太长，且效率低下，但是在没有更先进的设备的时候，这还是目前好的选择。
流式细胞分选仪是挑选细胞的不二法宝，在细胞分析分选当中占有重要一席。在很多抗体研发企业中，也都有用到流式细胞仪来挑选高产细胞株，在这一应用领域有其独特优势，分选快速（每秒上万个细胞）。
杂交瘤单克隆抗体制备技术的基本原理是利用聚乙二醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞在体外进行融合，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养(克隆化)，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能不断繁殖的杂交瘤细胞系，将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在其产生的腹水中即可得到高效价的单克隆抗体。由于单抗的应用是从体外诊断向体内肿瘤定位和治疗方向发展，故鼠源性单抗出现了难以克服的缺点，特别是在体内应用时，存在主要组织相容性抗原(MHC)和超敏反应问题。随着鼠源单克隆抗体在临床治疗中越来越广泛的应用，降低抗体免疫原性的要求也变得越来越迫切。为了克服这一问题科学家利用基因工程方法使小鼠的抗体人源化。通过构建人一鼠嵌合抗体，在一定程度上减弱了人抗鼠抗体。
为了克服鼠源性单克隆抗体存在的问题，科学家利用基因工程方法使小鼠的抗体人源化。通过构建人一鼠嵌合抗体，在一定程度上减弱了人抗鼠抗体。1984年Morrison等人成功地构建了第一个人鼠单克隆抗体即嵌合抗体。嵌合抗体指的是鼠单克隆抗体的恒定区基因被人抗体的恒定区基因通过基因重组技术所替换而编码并在合适的宿主细胞中表达而产生的单克隆抗体。
基本原理:抗体分子的特异性识别、抗原结合由轻链和重链可变区决定的，而异源蛋白产生的人抗鼠抗体反应的主要是抗体恒定区。将小鼠单抗恒定区用人源化恒定区代替而拼接成嵌合抗体，使其重链和轻链的可变区来自小鼠，恒定区来自人类。简言之嵌合抗体既具有抗原结合特异性，又大大地降低了鼠单抗的异源性。嵌合抗体是基因工程抗体最早研究出来的一种抗体，在肿瘤治疗和诊断方法已被广泛的应用。虽然嵌合抗体在一定程度上减弱了人抗鼠抗体反应，但仍存在一少部分鼠源成分。这直接导致抗体被迅速清除，从而降低治疗效果。
小分子抗体
小分子抗体顾名思义是分子量较小的抗体片段，它的抗体分子的抗原结合部位仅仅局限于重链和轻链的可变区。虽然分子很小但它既保持了亲本单抗的亲和力具有亲本单抗一样的特异性。种类主要包括:抗原结合片(Fab)抗体、Fv抗体、单链抗体、单域抗体与最小识别单位。
1.Fab抗体
Fab抗体为仅含Fab分子，Fab段由完整的轻链(恒定区CL和可变区VLCL)和重链Fd段(第一恒定区CH1和可变区VH)通过一个二硫键连接形成异二聚体，整个分了大小约占总抗体的三分之一，仅含有一个抗原结合位点。将完整轻链和重链Fd的编码基因进行连接，可在大肠杆菌中表达，形成完整的二硫键和立体折叠，可以保存Fab断的功能。常被用于实验室的研究工具。
2.Fv抗体
Fv抗体仅由轻链和重链的可变区组成通过非共价键连接，是抗体分了保留完整抗原结合部位的最小功能片段。该片段由于是通过非共价键连接的，所以稳定性不好，十分容易解离。采用适当的方法来解决Fv片段稳定性问题。
3.单链抗体
单链抗体的问世解决了Fv抗体的稳定性问题。它由适当的寡核普酸序列将轻链和重链可变区连接而成，形成单一链的分子，故称为单链抗体。就是单一链的结构大大增加了Fv片段的稳定性。相对完全抗体而言，单链抗体在临床上作为治疗剂有好多优越性。但它也有亲和力下降等缺点。
4.单域抗体
单域抗体仅含重链可变区，结构比Fv的亚单位还小，它是一个具有抗原结合活性的分子。同完整抗体相比，单域抗体仍然具有与抗体结合的同等能力及稳定性。
5.最小识别单位
比单域抗体还小的最小识别单位仅含可变区中单一CDR结构，分子量十分小仅占完全抗体的1%左右，亲和力也相当低，所以被命名为最小识别单位。虽然最小识别单位分子量小、亲和力低，但是它具有与抗原结合的能力。
人源性抗体
从最初的鼠源单抗技术到人源化技术，单克隆抗体在几十年的岁月中取得了突飞猛进的发展。人源化的问世使单克隆抗体基本解决了人抗鼠源性问题。但有用人源化的抗体基因均来自杂交瘤细胞。杂交瘤的这个操作过程很复杂且耗时加之利用杂交瘤技术难以制备自身抗原抗体和全人源抗体，这两大缺点成为基因工程抗体应用的绊脚石。随着科学技术的不断进步单克隆抗体进入了一个崭新的发展阶段一一人源性单克隆抗体。它主要包括噬菌体抗体库技术、转基因小鼠制备人源性抗体、核糖体展示技术三部分。
内容介绍：
小鼠单克隆抗体，基于单B细胞的抗体发现，是最新的单抗发现技术。小鼠单克隆细胞株，这种技术结合了单细胞分离鉴定技术和高通量测序技术，以单个B细胞为起始点，快速获得抗原特异性抗体。B细胞抗体开发技术适用于多个动物物种，抗体发现效率高、处理通量高。获得的抗体经体内天然成熟，具有丰富的基因多样性，可以为抗体药开发，提供更多的候选抗体分子。
兔子单克隆抗体，兔B细胞独特的个体发育机制，造就了高亲和力、高特异性且稳定的兔单克隆抗体（mAb）。兔mAb皮摩尔级的亲和力水平为临床诊断及治疗提供了更高的灵敏度，降低抗体用量的同时，也降低了药物副作用。此外，对小分子物质和精细表位的出色识别能力，也让兔单抗在免疫诊断试剂和抗体药开发中越来越受欢迎，特别是在免疫组织化学、肿瘤检测及靶向治疗方面。
兔单抗优势
结构稳定：90-95%的轻链为κ1，κ1的链内二硫键让轻链结构更稳定。
亲和力高：抗体KD值达10-12M，亲和力是常规抗体的100-1000倍。
识别精准：识别小分子（< 600 kDa）、PTM、单氨基酸取代等细微的表位变化。
多样性丰富：非近交品系繁殖，亲和力成熟时间长，SGC、SHM多样性机制相结合。
免疫应答强：对小分子抗原、半抗原可产生强烈免疫反应。
兔IgG没有亚类，N末端和D-E环中具有较少的氨基酸，易于分子克隆和工程设计，更适于抗体药物开发。兔抗90-95%的轻链为κ1，其VL和CL之间存在链内二硫键，轻链结构更稳定。兔单抗能够识别小分子及翻译后修饰、单个氨基酸取代等细微的表位变化，表位识别特异性更高。
服务流程：
方案沟通 
合同确认 
收到样品 进行实验并反馈 抗体或细胞株交付
如何下单：
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