技术服务

单克隆抗体制备

1.项目简介:

单克隆抗体是由一个只识别一种表位的B细胞克隆产生的同源抗体,特异性强,效价高,交叉反应少或无交叉反应,但其制备过程较为复杂。

单克隆抗体技术可针对生物大分子(主要是蛋白质)进行准确定性、定量、定位的手段,如今已经应用至生物研究的各个方面,例如通过细胞表面蛋白标记对细胞进行分类筛选分析的荧光细胞分选技术、展示细胞内特定蛋白定位的高分辨率荧光显微镜、检测蛋白质混合物中特定蛋白表达量的蛋白印迹法,常用于血清中细胞因子表达量测定的酶联免疫吸附测定等,这些技术都需要运用到高质量的单克隆抗体制剂。

2.服务流程:

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3.送样须知:

需提供蛋白或由我司进行目的蛋白表达纯化,多肽信息或由我司进行设计合成,小分子化合物等材料的详细信息;需要单克隆抗体的浓度与总量;是否需要提供鉴定结果,如需鉴定请提供抗体及其说明书。

4. 交付内容:

单克隆抗体:提供详细实验报告,2-3株单克隆细胞株,阳性细胞培养上清,纯化后抗体2-5mg,ELISA效价检测结果和Western blot结果。

多克隆抗体:提供详细实验报告,抗血清40ml 以及ELISA效价检测结果和Western blot结果。

5.项目周期:

多克隆抗体制备1个月左右;单克隆抗体3-6个月。

注意事项:

1、细胞融合的关键:

①技术上的失误常常导致融合的失败,例如淋巴细胞没有免疫反应,融合剂的选用以及融合细胞的操作。

②融合试验最大的失败原因是污染,融合成功的关键是提供一个无菌无毒的操作环境。

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2、抗原的制备:

抗原,是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答,并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合,发生免疫效应(特异性反应)的物质。

抗原的基本特性有两种,一是诱导免疫应答的能力,也就是免疫原性,二是与免疫应答的产物发生反应,也就是抗原性。

很多物质都可以成为抗原,抗原的具体分类可以参见抗原,在进行单克隆抗体制备过程中,很多物质都可以成为抗原,在常规的科研实验中,经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原。

3、阳性克隆细胞的筛选:

应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测,过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质,以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便,RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次,均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。


如何下单:

1. 邮件咨询下单:填写实验项目的信息后,发送至邮箱2062834891@qq.com。

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