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细胞STR鉴定

项目简介

     细胞系错误鉴定问题已有若干年历史,基于国际细胞库的分析数据显示,科研工作者对细胞鉴定依然处于一个意识淡薄的状态,应用于生物医学领域的细胞系需要鉴定的问题仍然很少有人关注。

近年来,大量研究表明 STR 基因分型 方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一,STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。美国的ATCC 细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR 分型提供了各细胞株的数据供比对。

    STR ( Short Tandem Repeat, 短串联重复序列)基因分型技术是细胞身份鉴定最准确有效的方法,被ATCC、ICLAC等权威机构认定为细胞鉴定的金标准。STR基因位点由长度为3~ 7个碱基对的短串连重复序列组成,广泛存在于人类基因组中,被称为细胞的DNA指纹。通过对这些STR位点的检测,将检查结果与专业的STR数据库比对,从而确定被测细胞的真实身份,或判断被测细胞是否与某些细胞,发生交叉污染。

    人源细胞STR分型(cell line STR genotyping),是选用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19个具有高度多态性基因座和一个性别基因位点Amelogenin对人源细胞进行STR分型检测。根据STR分型结果对细胞的生长状态(是否存在交叉污染)和细胞的株系进行确认的技术手段。

人源细胞STR位点信息

                D5S818

                D13S317

                D7S820

                D16S539

                VWA

                TH01

                AMEL

                TPOX

                CSF1PO

                D12S391

                FGA

                D2S1338

                D21S11

                D18S51

                D8S1179

                D3S1358

                D6S1043

                PENTAE

                D19S433

                PENTAD

细胞STR鉴定的必要性

减少细胞系的损失

避免时间和金钱的损失

避开在公众领域查询并(文献、专利等)提供错误信息

细胞错误造成实验结果不一致或不可重复

何时需做细胞STR鉴定

  1、发表文章或申请课题经费前

  2、使用细胞进行临床治疗(试验)前

  3、准备冻存保种或已冻存多年的细胞

 4、一个涉及到细胞试验项目开始/结束时

  5、新得到的细胞或实验室传5代以上的细胞

 6、细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大

 7、文章发表或常规定期鉴定

    实验周期和报价

    周期:1周左右

    报价:1500/样

    检测流程

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    1.确定STR位点,设计实验方案,包括荧光标记的选择,引物的设计、合成和标记,荧光分子量内标的选用等。

    2.按照所设计的实验方案完成荧光PCR,利用琼脂糖电泳检测结果;若PCR产物特异性不够,将进行优化。

    3.PCR产物通过ABI 3730XL测序仪器进行毛细管电泳检测,获得扩增片段大小的数据

    4.用GeneScan 3.0/GenoTyper 2.0或GeneMapper 3.2等软件对收集到的数据进行处理分析,将产物片段大小、数量多少的信息转化成直观准确的波形图谱,为下一步进行关联分析或连锁分析等遗传分析提供可靠的数据。

    服务内容

    细胞收集,基因组DNA提取

    荧光引物PCR扩增21个str位点

    产物经测序仪电泳,获得细胞基因分型结果

    结果与ATCC、DSMZ、JCRB和RIKEN等细胞库比对和分析

    样品要求

    1. PCR产物或基因组DNA:浓度≥200ng/ul,总体积≥20ul,OD260/280在1.7至2.0之间;新鲜组织样品:总量≥100mg的新鲜组织样品或1~2ml血液样品

    2. PCR产物或基因组DNA请提供样品的电泳检测图

    3. 由于在实验过程中,可能会出现某些STR位点难以检测的情况,建议提供3~4个备选STR位点

    4. 建议使用6FAM, VIC, NED以及PET四种荧光标记

    5. 为尽量避免多种荧光信号的相互干扰,不建议同管检测使用的荧光多于2种,多种荧光同管检测,PCR产物大小需相差50bp以上

    6. STR检测中常会出现一些比正常产物短2~4个碱基的峰,这是由截断PCR造成的,属于正常现象,并不会影响实验结果的分析。

细胞系STR 概况报告包含:

    简单易懂的STR等位基因表

    支持每个位点的等位基因调用的电泳图

    结果的综合解释

    STR 分型图谱和细胞鉴定结果的书面报告 (中英文报告)

STR分型图谱
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STR检测结果
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    STR鉴定应用

    STR分析已广泛应用于遗传制图、连锁性分析、亲子鉴定、疾病基因定位和物种多态性研究等诸多领域。高度多态的微卫星还可以用来在人群进行个体识别。刑事案件的侦破离不开法医学的帮助,其中Y-STR检测手段在鉴定中发挥的作用尤为突出。

    Y-STR检验是法医学对精子的一种DNA检测手段,Y-STR基因座是位于男性Y染色体上的人类多态性STR位点,一般情况下,只有男性个体才有Y染色体,因此,Y-S T R具有男性遗传,男性特异性的特点。Y-S T R即可作为性别鉴定的依据,同时在法医学精斑及混合斑检验中发挥着重要作用。Y染色体为男性个体特有且呈现男性伴性遗传,Y-STR检测技术可以对嫌疑人或被害人的身份认定进行有效确认,故作为一种补充检验技术,此项技术在个体识别、亲子鉴定、血缘关系鉴定及族谱DNA分析等方面具有十分重要的研究和应用价值。

如何下单

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